國標委發布《高致病性禽流感診斷技術》 新增RT-PCR等兩種檢測方法
潤澤科器 - 2021-03-03
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化工儀器網 時事熱點】2020年12月初，法國農業部發表聲明中，法國國家衛生安全署(ANSES)參考實驗室確認，該國西南部一家養殖場有6000只鴨子感染H5N8型病毒，并發現大量鴨子迅速死亡。2021年1月6日，法國農業部后續通報，該國朗德省(Landes)養禽場發生22起家禽H5N8亞型高致病性禽流感疫情，5121只家鴨和珍珠雞感染，274只死亡，2.5萬只被撲殺。
近幾年，H5N8型病毒已先后在歐洲以及日本、韓國、中國臺灣等多個國家和地區均發生過規模化爆發，引發了多方關切。
為保護我國畜牧業安全，加強高致病性禽流感的診斷技術，確保第一時間發現疫情，做到可防可控。近日，國家市場監督管理總局國家標準化管理委員會正式發布《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2020)國家標準，該標準由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所、中華人民共和國北京海關、中國動物衛生與流行病學中心等單位負責起草。
標準規定了高致病性禽流感臨床診斷，樣品采集、保存與運輸，病毒分離與鑒定，血凝和血凝抑制劑試驗，禽流感病毒RT-PCR試驗和禽流感病毒熒光RT-PCR試驗的技術要求。
本標準將代替《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2003)標準，與舊標準相比，新標準在技術方面出現幾點變化：一是增加了禽流感病毒RT-PCR試驗； 二是增加了禽流感病毒實時熒光RT-PCR試驗；三是刪除了瓊脂凝膠免疫擴散(AGID)試驗；四是刪除了間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。
此次新增的禽流感病毒RT-PCR試驗和熒光RT-PCR試驗主要適用于檢測禽組織、分泌物、排泄物等物質中的禽流感病毒核酸。
目前 PCR 技術只能擴增 DNA 模板，對 RNA 模板不能直接擴增。 mRNA反轉錄生成的 cDNA 可作為 PCR 的模板進行擴增，這種在 mRNA 反轉錄后進行的 PCR 擴增稱為 RT-PCR 。 其特點是雜交靈敏度高，對 RNA 的質量要求較低，操作簡便。目前該技術廣泛應用于分析
基因的轉錄產物、獲取目的
基因、
合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統等科研中。
而實時熒光RT-PCR(熒光定量聚合酶鏈式反應)指的是在PCR進行的同時，對其過程進行實時監測的能力，數據可在PCR擴增過程中進行收集，而非在PCR結束之后，反應以循環中首次檢測到目標擴增的時間點為特征，而非在一定循環數后目標分子累計的擴增量。目標核酸的起始拷貝數越高，則會越快觀察到熒光的顯著增加。相反，終點法檢測(也稱 “讀板檢測”)測量的是PCR循環結束時累計的PCR產物量。
在儀器設備方面，新標準對適用儀器PCR擴增儀及配套反應管、高速臺式冷凍離心機、生物安全柜、微量
移液、熒光PCR儀等的配備要求及操作規范做了清晰的介紹。
標準是科學、技術及實驗經驗的總結。每一項標準的出臺都是因時因需而生，標準的制定為某個領域在一定范圍內達到最佳秩序起到良好的規范作用。時隔18年，《高致病性禽流感診斷技術》(G/B T 18936—2020)國家標準的發布，對于高致病禽流感病毒的檢測工作具有重要的技術指導意義。
